Bakit ginagamit ang GAPDH sa Western Blot? + Halimbawa

Bakit ginagamit ang GAPDH sa Western Blot? + Halimbawa
Anonim

Sagot:

Ang GAPDH ay kadalasang ginagamit bilang kontrol sa pag-load.

Paliwanag:

Sa Western blotting madalas naming gamitin ang GAPDH bilang isang kontrol sa paglo-load. Ang ibig sabihin nito ay na sa pamamagitan ng probing para sa GAPDH maaari naming suriin na mayroon kaming isang load na katumbas na halaga ng mga protina sa iba't ibang mga daan ng blot.

Isang halimbawa ng paggamit - sinasabi namin na may sakit na sa tingin namin ay nagiging sanhi ng isang elevation ng isang partikular na protina sa cell. Magkakaroon kami ng sample mula sa "malusog" na mga selula at isa pang sample mula sa "mga sira" na mga selula. Pagkatapos ay i-load namin ang katumbas na halaga ng protina ng parehong mga sample papunta sa isang gel para sa Western blot.

Matapos ang pagtuklas ng blot para sa aming protina ng interes, nakita namin na sa mga sakit na selula na ang antas ng protina ay sa katunayan ay nakataas (na isang darker na banda ay ginawa sa blot). Upang patunayan na ang pagtaas sa protina ay dahil sa isang pagbabago ng expression sa cell, sa halip ng isang pagkarga artepakto (iyon ay, ang mas instense band ay sanhi ng isang pagbabago sa protina expression sa mga cell, at hindi sa amin sa pamamagitan ng hindi sinasadya loading more ng "sakit" na sample kaysa sa "malusog") ay susuriin din natin ang blot para sa GAPDH upang ipakita na ang kabuuang antas ng protina ay pareho sa parehong mga daanan.

Samakatuwid, sa pamamagitan ng paggawa nito ipinapakita namin na ang katumbas na protina ay na-load sa dalawang daan at ang pagbabago sa band intensity namin ay obserbahan ay dahil sa mga pagbabago sa protina expression para sa protina ng interes.