Bakit ang mga hakbang sa lysis ng DNase at lysozyme na ginagamit sa paglilinis ng protina?

Bakit ang mga hakbang sa lysis ng DNase at lysozyme na ginagamit sa paglilinis ng protina?
Anonim

Sagot:

Upang linisin ang Fraction ng Protein …

Paliwanag:

Kung ikaw ay nagpapadalisay ng isang (madalas tiyak na) protina, kakailanganin mong mapupuksa ng mas maraming basura na maaari mong maitali sa kanila.

Depende ito sa isang lawak kung saan mo sinusunod ang protina, ngunit sa pangkalahatan ito ay isang magandang ideya, lalo na sa paghahanda paglilinis, upang mapupuksa ng maraming mga impurities hangga't maaari.

1:

Tulad ng mga protina sa pangkalahatan ay malaki, at ang resulta ay lilitaw sa mas mababang mga band ng iyong (ultracentrifuged) fraction, nais mong mapupuksa ang anumang nucleid acids, lalo na kung ang protina ikaw ay puryfying alalahanin ang gusto ng Pol1, Baliktarin ang Transcriptase o anumang iba pang enzyme na kasangkot sa Replication / Transcription / Translation..

Maaari mong paghiwalayin ang mga Nucleic acids na nasa sample sa pamamagitan ng paggamit ng isang DNAse: ito ay ganap na hydrolyse DNA sa mga bahagi nito ng bumubuo.

Isipin mo, may iba't ibang DNAse, lahat ay magkakaiba sa kanilang mekanismo at pagtitiyak para sa kanilang substrate. Depende sa ginamit na DNAse, maaari itong ipakita Endo- o Exo- Aktibong aktibidad …

Higit pa sa punto, RNAse ay mas angkop, dahil ang RNA ay kadalasang higit pa sa loob ng buoyancy / fraction na hanay ng mga protina, at maaaring nakatali sa protina.

2:

Lysozyme: Ang isang enzyme na mayroong hindi bababa sa dalawang mga function:

Ito deglycosylates enzymes: Karamihan sa mga protina na dinadala sa daluyan ng dugo ay Glycosylated: mayroon silang ilang mga molecule ng asukal na naka-attach sa kanila. Aalisin ng Lysozyme ang mga residue ng asukal.

Mayroon din itong kapasidad na masira ang cell wall ng Gram-Positive bacteria, na nagiging sanhi ito lyse. (Kung gusto mong linisin ang protina mula sa Gram-positive bacteria)

Ang anumang mga nagpapahina ng mga produkto, alinman sa nucleic acid o mga labi ng asukal, ay lilitaw sa mga nangungunang fractions ng Centrifuge Tube dahil sa kanilang "lighter" buoyancy ….