Bakit gumagamit kami ng negatibong kontrol sa PCR?

Bakit gumagamit kami ng negatibong kontrol sa PCR?
Anonim

Sagot:

Tingnan sa ibaba

Paliwanag:

Gumagana ang PCR ng isang DNA ng template. Sinasabi mong sinusubok ka para sa HIV (ang HIV ay isang RNA virus, ngunit kapag pumasok ito sa isang cell, ito ay makakakuha ng DNA … kaya magkakaroon ng DNA sa isang nahawaang selula). Ang mga primers na ginagamit mo ay gumawa ng isang produkto (amplicon) na tumutugon sa bahagi ng DNA ng HIV. Kung nakikita mo ang amplicon na ito, pagkatapos ay mayroon kang naroroon ang sequence ng HIV ….. ngunit kung wala kang negatibong kontrol, maaaring may kontaminasyon ka.

Ang PCR ay sobrang pundamental. Mayroong maraming mga solusyon na ginagamit sa PCR (tubig, buffer, dNTPs, enzyme) … at lahat ng mga ito ay madaling makontamina sa DNA mula sa iba pang mga sample, o kahit na mula sa amplicon na ginawa sa reaksyon mo kahapon. Kaya kung mayroon kang sample ng DNA ng Patient X at sinusuri mo ang HIV sa pamamagitan ng PCR, ang mga PCR primer ay maaaring gumawa ng isang produkto mula sa DNA ng DNA sa sample ng Pasyente X ng DNA (kung ang taong iyon ay may HIV), o maaari itong gawin ng karumihan. Ngunit hindi mo masabi kung ito ay mula sa kontaminasyon o mula sa HIV sa mga pasyente ng DNA.

Kaya nagpapatakbo ka ng kontrol ng tubig. Ang Tube 1 ay inilalagay mo ang lahat ng mga bahagi ng reaksyon, at para sa DNA ay nagdaragdag ka lamang ng tubig. Ito ang negatibong kontrol. WALA dapat palakasin dito. Sa Tube 2 inilagay mo ang lahat ng mga bahagi ng reaksyon at DNA ng Pasyente X. Kung nakakuha ka ng isang produkto dito, (at wala sa Tube 1), ang Patient X ay maaaring mayroong DNA ng DNA sa kanyang DNA. Kung nakakuha ka ng isang produkto sa parehong Tube 1 at Tube 2, mayroon kang problema sa kontaminasyon at hindi mo masasabi kung ang HIV sa sample ng Pasyente ay mula sa sakit o mula sa kontaminasyon.

Kaya palagi kang nagpapatakbo ng isang kontrol ng tubig (tubig sa lugar ng DNA).